Молекулярно-генетические методы идентификации

Метод идентификации генетически модифицированных источников растительного происхождения (ГОСТ Р 52173-2003 «Сырьё и продукты пищевые. Метод идентификации генетически модифицированных источников (ГМИ) растительного происхождения» и ГОСТ Р 52174-2003 «Биологическая безопасность. Сырьё и продукты пищевые. Метод идентификации генетически модифицированных источников (ГМИ) растительного происхождения с применением биологического микрочипа») основан на ПЦР с соответствующими праймерами, с применением микрочипа – на асимметричной мультиплексной ПЦР (амПЦР) с последующей гибридизацией продуктов этой амПЦР на биологическом микрочипе.

Проведение испытания описано в ГОСТ Р 52173 и ГОСТ Р 52174.

ПЦР основана на многократном избирательном копировании участка нуклеиновой кислоты (амплификация) изучаемого объекта с помощью специальных праймеров (олигонуклеотидные цепочки, комплементарные определённой последовательности фрагмента ДНК или РНК выявляемого материала). При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце.

Это обеспечивает высокую чувствительность и специфичность метода ПЦР. В настоящее время коммерческие наборы позволяют определить наличие в образце тканей различных животных – коровы, козы, свиньи, овцы, оленя, курицы, гуся, индейки и утки, а также растительные ткани кукурузы, сои и др.

Двухцепочечную ДНК-матрицу нагревают до 94 – 96 °C на 0,5 – 2 мин, чтобы цепи ДНК разошлись (денатурация). Когда цепи разошлись, температуру понижают, чтобы праймеры могли связаться с одноцепочечной матрицей (отжиг). Затем ДНК-полимераза реплицирует матричную цепь, используя праймер в качестве затравки (элонгация).